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? ? ? ?在進(jìn)行生物信息學(xué)評(píng)估之后，通常會(huì)通過(guò)全面產(chǎn)品表征，對(duì)潛在候選分子進(jìn)行實(shí)驗(yàn)評(píng)估。

? ? ? ?通常，用于可開(kāi)發(fā)性評(píng)估的樣本，是通過(guò)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染（例如HEK293細(xì)胞）產(chǎn)生的。可以評(píng)估與表達(dá)宿主無(wú)關(guān)的特性，例如一級(jí)序列，疏水性，溶解性，熱穩(wěn)定性和抗原結(jié)合親和力。

? ? ? ?因?yàn)镻TM高度依賴于細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)條件，因此通過(guò)可開(kāi)發(fā)性評(píng)估，候選分子進(jìn)入工藝開(kāi)發(fā)階段，通常換成CHO等細(xì)胞，穩(wěn)定表達(dá)，進(jìn)行工藝優(yōu)化。

? ? ? ?預(yù)期氨基酸序列的構(gòu)象是進(jìn)一步分析和開(kāi)發(fā)mAb先導(dǎo)候選分子的先決條件?，F(xiàn)代質(zhì)譜（MS）具有以≤2Da的精度準(zhǔn)確測(cè)量IgG的分子量（約150kDa）的能力?？梢酝ㄟ^(guò)液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）和MS/MS肽圖確認(rèn)完整的一級(jí)序列。

多項(xiàng)研究表明存在低豐度序列變異體，通過(guò)使用LCMS/MS與數(shù)據(jù)庫(kù)搜索相結(jié)合，可以檢測(cè)和鑒定低水平的序列變異體;存在極低豐度序列變異體的原因：可能是自然發(fā)生的轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程中的低頻錯(cuò)誤。

? ? ? ?LC-MS具有很高的靈敏度，快速的周轉(zhuǎn)時(shí)間，最重要的是能夠獲得深入序列及修飾信息，因此在可開(kāi)發(fā)性評(píng)估中起著至關(guān)重要的作用。可從LC-MS完整分析，從亞基或肽水平獲得PTM信息。

? ? ? ?LC-MS分析能夠檢測(cè)各類修飾，例如糖型，N末端pyroGlu，C末端Lys，C末端酰胺化和糖基化。在亞基水平或還原成輕鏈和重鏈后的LC-MS分析將修飾定位于Fab，F(xiàn)（ab′）2，F(xiàn)c區(qū)，輕鏈或重鏈。

? ? ? ?除了傳統(tǒng)上使用的木瓜蛋白酶，使用有限的Lys-C或Ides酶消化可以實(shí)現(xiàn)更特異性的消化。IdeS消化和還原的結(jié)合，將每個(gè)片段的分子量降低到23-25 kDa，從而可以測(cè)量單同位素分子量。最終，在肽水平上的分析，可以精確定位完整和亞基水平的修飾位點(diǎn)。更重要的是，在肽水平上的分析，可以檢測(cè)到在完整和亞基水平上無(wú)法檢測(cè)到的修飾，例如Asn脫酰胺，分子量差異約為1 Da。由于色譜分離，沒(méi)有分子量差異的修飾，例如Asp異構(gòu)化，從L-Cys到D-Cys和Ser外消旋化，也可以通過(guò)LC-MS檢測(cè)。

? ? ? ?修飾與安全性和功效問(wèn)題有關(guān)。包括脫酰胺，異構(gòu)化，Met和Trp氧化，未配對(duì)的半胱氨酸和可變域中的其他糖基化。在擴(kuò)展的表征和強(qiáng)制降解研究期間，應(yīng)仔細(xì)檢查這些修飾。

? ? ? ?寡糖有三種類型，α1,3-Gal，NGNA和高甘露糖，應(yīng)仔細(xì)評(píng)估。如前所述，α1,3-Gal和NGNA具有免疫原性。由于缺乏核心巖藻糖，高甘露糖已被證明可導(dǎo)致較短的體內(nèi)半衰期并增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）。

? ? ? ?此外，由于巖藻糖基化水平與增強(qiáng)的ADCC相關(guān)，因此必須對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測(cè)，這取決于mAb的作用機(jī)理（MOA），可能是有益的或有害的。對(duì)于需要抗體依賴細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞，則是有益的，但對(duì)于阻斷性抗體，則是有害的。

? ? ? ?尚未報(bào)道這組修飾會(huì)影響產(chǎn)品的安全性或功效，但可能會(huì)引起免疫原性（因?yàn)檫@些修飾在人類內(nèi)源性IgG或降解產(chǎn)物中均不存在），這組修飾包括部分前導(dǎo)序列，三硫鍵，硫醚和糖基化。為了最大程度地降低這種風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)選擇這些修飾類型中含量最低的單克隆抗體候選物。此類別中的修飾也可能高度依賴于細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)參數(shù)，例如溫度，pH，培養(yǎng)基組成和配方。

與Fc的糖基化相關(guān)的末端Gal的水平也由于其對(duì)過(guò)程變化的敏感性而值得注意。末端Gal對(duì)結(jié)構(gòu)，穩(wěn)定性或清除沒(méi)有影響。最近的研究表明，末端半乳糖可能對(duì)ADCC的影響最小，但對(duì)CDC（(complement dependent cytotoxicity test) 補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性試驗(yàn)）的影響卻很大。因此，對(duì)于涉及CDC的MOA的mAb候選分子，應(yīng)考慮末端半乳糖的水平。由于末端半乳糖基化的水平隨細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)條件的不同而變化，因此在開(kāi)發(fā)過(guò)程的后期可能需要重新評(píng)估。

? ? ? ?FcRn結(jié)合是影響mAb半衰期的最關(guān)鍵因素之一。通常通過(guò)Biacore測(cè)量mAb候選物的FcRn結(jié)合親和力，已開(kāi)始使用生物層干涉術(shù)（BLI）或FcRn親和色譜的新替代方法。與Biacore和親和色譜相比，使用BLI可獲得更高的通量。通常，在酸性pH下具有更強(qiáng)FcRn結(jié)合，但在中性pH下具有快速解離的mAb，顯示出更長(zhǎng)的體內(nèi)半衰期。

? ? ? ?熱穩(wěn)定性是蛋白質(zhì)在不同溫度環(huán)境下維持其結(jié)構(gòu)和功能完整性的能力，并且是mAb的固有特性，可在制造和存儲(chǔ)過(guò)程中影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性，例如聚集。mAb候選物的高熱穩(wěn)定性表明結(jié)構(gòu)良好，需要更多的能量才能展開(kāi)。因此，mAb的較高熱穩(wěn)定性通常與較低的部分展開(kāi)和聚集趨勢(shì)相關(guān)。除了聚集以外，還顯示出熱穩(wěn)定性較低的單克隆抗體的表達(dá)也較低。

通常通過(guò)差示掃描量熱法（DSC）來(lái)測(cè)量熱穩(wěn)定性。使用差示掃描熒光法（DSF）可以對(duì)96或384個(gè)樣品進(jìn)行高通量熱穩(wěn)定性篩選?？梢曰讷@得的熱力學(xué)參數(shù)（例如，展開(kāi)的中點(diǎn)溫度（Tm）或展開(kāi)溫度的起始時(shí)間（Tonset））對(duì)在相同條件下分析的多個(gè)候選對(duì)象進(jìn)行排名。

? ? ? ?溶解度是mAb的重要可開(kāi)發(fā)性參數(shù)，尤其是考慮到更高濃度制劑（100 mg / mL及更高濃度）發(fā)展的趨勢(shì)。單克隆抗體在整個(gè)加工，儲(chǔ)存和給藥過(guò)程中必須保持可溶。低溶解度會(huì)導(dǎo)致純化，無(wú)菌過(guò)濾，填充和精加工，運(yùn)輸，儲(chǔ)存過(guò)程中出現(xiàn)問(wèn)題，更重要的是，會(huì)影響活性，生物利用度和免疫原性。從方法來(lái)看，對(duì)于所有色譜步驟，在用于生物處理的緩沖液中的最小溶解度（例如20-30mg/mL）是必需的。在最終的超濾/滲濾（UF/DF）步驟中，將單克隆抗體以高于目標(biāo)藥物產(chǎn)品的濃度緩沖液交換到制劑緩沖液中，因此需要更高的溶解度。

? ? ? ?單抗較低的溶解度通常是由于與暴露的疏水或帶電斑塊的強(qiáng)烈自締合引起的。單克隆抗體的二價(jià)性質(zhì)放大了它們的自締合趨勢(shì)。由構(gòu)象變化或化學(xué)修飾引起的膠體不穩(wěn)定性也會(huì)導(dǎo)致mAb的溶解性差。此外，mAb的溶解度通常受溶液性質(zhì)的影響，例如緩沖液的組成，離子強(qiáng)度，pH和溫度。

? ? ? ?根據(jù)氨基酸序列預(yù)測(cè)mAb候選物的溶解度具有挑戰(zhàn)性，因此應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究mAb的溶解度。但是，研究mAb的溶解度直接需要大量的蛋白質(zhì)，通常為數(shù)百毫克，因此通常不生產(chǎn)如此大量的所有候選物用于溶解度研究。由于可用于開(kāi)發(fā)性評(píng)估研究的樣本數(shù)量有限，因此通常使用間接測(cè)量方法。例如，向mAb溶液中添加聚乙二醇（PEG）會(huì)導(dǎo)致濃度低得多的沉淀，因此可通過(guò)外推至PEG濃度為零來(lái)確定mAb的表觀溶解度?？梢砸愿咄糠绞綖閙Ab候選者選擇實(shí)現(xiàn)此方法。但是，PEG誘導(dǎo)的沉淀可能無(wú)法真正反映mAbs溶解度差的機(jī)理，因此應(yīng)考慮采用正交方法或直接評(píng)估高濃度下的溶解度以確認(rèn)預(yù)測(cè)的溶解度或驗(yàn)證等級(jí)順序。

? ? ? ?還可以通過(guò)測(cè)量滲透第二維里系數(shù)B22（與分子間相互作用相關(guān)的熱力學(xué)參數(shù)）來(lái)預(yù)測(cè)使用低濃度樣品的mAb的高濃度行為。正和負(fù)B22值分別表示排斥力或吸引力。影響B(tài)22的參數(shù)包括靜電相互作用，范德華力，排除體積，水合力和疏水作用。在許多獲得B22值的方法中，例如自相互作用色譜（SIC），膜滲透壓（MO）和分析超離心（AUC), 最常見(jiàn)的方法是通過(guò)靜態(tài)光散射（SLS）。最近，該值被用于確定通用溶解度線，即“液相線”，作為mAb相圖的一部分。

交叉相互作用色譜法（CIC）分析，由Jacob等人介紹。充分利用了色譜柱上的累積效應(yīng)來(lái)捕獲測(cè)試mAb與大量（30mg）固定化人血清IgG之間的弱結(jié)合。由于暴露的粘性表面（疏水性或電荷性），CIC分析中洗脫較晚的單克隆抗體與溶解性差相關(guān)。另一個(gè)值得一提的方法是自相互作用納米粒子光譜學(xué)，它使用金納米粒子將mAb分子濃縮到高的局部濃度，以放大弱的自相互作用。該方法也可用于單克隆抗體候選物的高通量篩選。

? ? ? ?通過(guò)皮下（SC）注射給藥的高濃度藥物產(chǎn)品需要具有可控粘度的制劑，這使其成為早期評(píng)估的另一個(gè)關(guān)鍵因素，從而緩解可開(kāi)發(fā)性問(wèn)題。高粘度可能對(duì)最終的UF/DF步驟和填充/精加工操作構(gòu)成挑戰(zhàn)。粘性藥品會(huì)導(dǎo)致輸送困難，導(dǎo)致患者依從性降低。粘性樣品還可能對(duì)分析方法的開(kāi)發(fā)和儀器提出采樣挑戰(zhàn)。

? ? ? ?mAb的高粘度是由于通過(guò)靜電或疏水相互作用或兩者結(jié)合而產(chǎn)生的強(qiáng)烈的自締合引起的。盡管可以探索許多配方參數(shù)，包括pH值，鹽，糖以及各種小分子賦形劑和去污劑，用以降低粘度。但是選擇最小內(nèi)在問(wèn)題，例如暴露于疏水性或帶電斑塊的mAb候選分子，是降低高粘度風(fēng)險(xiǎn)的最有效方法。

? ? ? ?可以采用多種方法來(lái)測(cè)量粘度，包括Cannon-Fenske Routine粘度計(jì)，泰勒錐板法和各種流變儀。用于測(cè)量粘度的大多數(shù)常規(guī)技術(shù)需要大量材料。為了克服這一挑戰(zhàn)，特別是在可開(kāi)發(fā)性評(píng)估方面，已開(kāi)發(fā)出一種高通量DLS方法，該方法基于對(duì)高濃度mAb溶液中表觀聚苯乙烯珠半徑的測(cè)量，以反算mAb溶液的粘度。此方法僅可用于不與微珠相互作用的mAb，否則無(wú)法可靠地測(cè)量表觀微珠半徑。從DLS測(cè)量得出的高通量擴(kuò)散相互作用參數(shù)也已顯示與粘度相關(guān)。近年來(lái)，允許使用≤100μL進(jìn)行粘度測(cè)量并具有自動(dòng)樣品處理功能的儀器已在市場(chǎng)上出售，它們適用于在開(kāi)發(fā)性評(píng)估過(guò)程中測(cè)量粘度。

? ? ? ?由于粘度對(duì)工藝和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)十分重要，因此，為開(kāi)發(fā)性評(píng)估定義粘度目標(biāo)是非常重要。制劑粘度至少應(yīng)足夠低，以允許通過(guò)手動(dòng)注射來(lái)遞送藥物制劑。粘度目標(biāo)通常是根據(jù)每個(gè)公司的內(nèi)部開(kāi)發(fā)經(jīng)驗(yàn)制定的，尤其是在開(kāi)發(fā)帶有預(yù)填充注射器和自動(dòng)注射器裝置的SC產(chǎn)品時(shí)。例如，建議將粘度分為三類：1）“首選”粘度為10 cP或更低；2）10至20 cP之間的“可接受”粘度；和3）“不可接受”的粘度> 20 cP?？梢詫⑵溆米鞫x粘度目標(biāo)的起點(diǎn)，同時(shí)還要考慮工藝研發(fā)和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)的內(nèi)部經(jīng)驗(yàn)以及輸送設(shè)備（例如自動(dòng)注射器）的產(chǎn)品知識(shí)。

? ? ? ?聚集體是最常觀察到的與產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)。由于其會(huì)導(dǎo)致免疫原性，所以需要進(jìn)行密切監(jiān)控。因此，它是可開(kāi)發(fā)性評(píng)估的關(guān)鍵組成部分。除了使用預(yù)測(cè)工具外，還可以在擴(kuò)展的表征和強(qiáng)制降解研究期間直接測(cè)量聚集傾向。盡管通常由于材料限制只能獲得低濃度的數(shù)據(jù)，但重要的是評(píng)估中高濃度（50-100 mg / mL）范圍內(nèi)mAb的膠體穩(wěn)定性和聚集傾向。

? ? ? ?通常，十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）或毛細(xì)管電泳（CE-SDS）用于在變性條件下還原或非還原下測(cè)定mAb單體，片段和共價(jià)聚集體。多種方法可用于在天然條件下測(cè)量mAb可溶性聚集體（二聚體，低聚物或亞可見(jiàn)顆粒）。體積排阻色譜法（SEC）是確定mAb的高分子量蛋白（例如二聚體，三聚體或低聚物）和低分子量蛋白的最常用方法。它可以在擴(kuò)展表征和強(qiáng)制降解期間評(píng)估聚集體。值得一提的是，SEC有時(shí)可以揭示單體，聚集體和碎片百分比以外的其他屬性。mAb的SEC異常行為（例如峰拖尾）可能表明其生物物理特性不理想。較長(zhǎng)的保留時(shí)間和不對(duì)稱峰形可能表明mAb與SEC色譜柱之間存在非特異性相互作用。研究表明，SEC甚至可以將含有琥珀酰亞胺中間體的mAb變異體與具有Asn脫酰胺基（17Da）或Asp異構(gòu)化（18Da）的單克隆抗體分離。SEC還顯示，包含氧化Trp的mAb變體早于主峰洗脫。這些示例表明，對(duì)SEC數(shù)據(jù)的解釋?xiě)?yīng)謹(jǐn)慎進(jìn)行，因?yàn)樵缤淼姆蹇赡懿⒉豢偸谴砀叻肿恿康鞍谆蛘叩头肿恿康鞍住?/span>

? ? ? ?對(duì)于大型聚集體，可以使用光散射來(lái)表征<1nm至1-10μm范圍內(nèi)的顆粒。DLS方法可用于確定mAb的流體動(dòng)力學(xué)直徑和相互作用參數(shù)（例如KD），這些參數(shù)可在高通量模式下以較低的樣品消耗運(yùn)行。也可以考慮使用測(cè)量濁度的方法（例如，可見(jiàn)波長(zhǎng)處的光密度和濁度法）來(lái)檢測(cè)亞微米/亞可見(jiàn)顆粒。這些技術(shù)可以針對(duì)高通量和低的體積消耗來(lái)開(kāi)發(fā)，因此可以用于可開(kāi)發(fā)性評(píng)估?？梢允褂霉庾璺ǎɡ鏗IAC）和流動(dòng)成像方法（例如微流成像（MFI）進(jìn)行亞可見(jiàn)粒子表征和定量，以檢測(cè)大于2μm的尺寸。目測(cè)方法用于檢測(cè)可見(jiàn)范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)顆粒，通常>70至100μm。

? ? ? ?除了直接測(cè)量聚集體的水平外，還可基于疏水性或蛋白質(zhì)相互作用對(duì)聚集傾向進(jìn)行排名，因?yàn)樗鼈兪蔷奂闹饕?qū)動(dòng)力。諸如1-苯胺基萘磺酸鹽（ANS）和硫代黃素等熒光染料可用于以最少的樣品需求以高通量方式探測(cè)暴露的疏水斑塊。親和捕獲自相互作用納米粒子光譜學(xué)（AC-SINS）可提供有關(guān)不同溶液條件下的相互作用和聚集傾向的粗粒度信息，可用于在可開(kāi)發(fā)性評(píng)估中發(fā)揮作用。

? ? ? ?mAb的電荷變化反映了各種PTM的總和。在整個(gè)開(kāi)發(fā)過(guò)程中都需要密切監(jiān)測(cè)mAb的變體，以確保一致的峰分布。由于電荷變化對(duì)工藝改變的過(guò)程非常敏感，因此當(dāng)工藝發(fā)生變化時(shí)，電荷變化是證明可比性的具有挑戰(zhàn)性的質(zhì)量屬性之一。

? ? ? ?典型的mAb電荷變異體特征是通過(guò)基于電荷的方法（例如離子交換色譜法和等電聚焦）表征的，通常包含一個(gè)主峰以及幾個(gè)較小的酸性和堿性峰。導(dǎo)致形成酸性或堿性物質(zhì)的修飾如表5所示。值得一提的是，幾種修飾可能會(huì)影響mAb變異體的色譜分離，從而徹底改變mAb結(jié)構(gòu)。例如，具有較小寡糖的mAb有助于堿性物質(zhì)的形成，而氧化的Met可能有助于酸性或堿性物質(zhì)的形成。類似地，重鏈可變域中的不完全形成的二硫鍵也可能有助于酸性或堿性物質(zhì)的產(chǎn)生。

? ? ? ?傳統(tǒng)上使用等電聚焦凝膠電泳（IEF）分析mAb電荷變異體。這種半定量勞動(dòng)密集型方法依靠染料染色進(jìn)行檢測(cè)。它還具有通量低，缺乏自動(dòng)化和可重復(fù)性差的問(wèn)題。毛細(xì)管IEF（cIEF）克服了IEF的大部分限制，并提供了其他優(yōu)勢(shì)，包括高靈敏度，自動(dòng)化和低樣品消耗。此外，成像的cIEF（icIEF）在分析mAb電荷變異體方面已廣受歡迎，因?yàn)檎麄€(gè)毛細(xì)管成像消除了傳統(tǒng)cIEF使用的麻煩的操作步驟。

? ? ? ?毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）可根據(jù)電荷和流體動(dòng)力學(xué)半徑分離mAb電荷變體。與cIEF相比，此方法可以輕松以較高通量進(jìn)行平臺(tái)化。CZE也可以與質(zhì)譜儀在線耦合。CZE-MS已用于分析來(lái)自胰蛋白酶肽的N-連接聚糖，并分析脫酰胺和異構(gòu)化位點(diǎn)。單次CE MS運(yùn)行已證實(shí)可確認(rèn)100％的一級(jí)結(jié)構(gòu)并顯示出多個(gè)PTM，包括糖基化，N末端Gln環(huán)化，脫酰胺和異構(gòu)化。

? ? ? ?離子交換色譜（IEX），包括陽(yáng)離子交換和陰離子交換，已被廣泛用于監(jiān)測(cè)mAb電荷變體。IEX允許收集餾分以進(jìn)一步表征。當(dāng)使用pH梯度時(shí)，可以分析多個(gè)mAb，這意味著建立平臺(tái)方法的潛力。強(qiáng)陽(yáng)離子交換（SCX）色譜與弱陽(yáng)離子交換色譜相比，具有相對(duì)較高的通量。當(dāng)比較總體電荷分布時(shí)，IEF通常在陽(yáng)離子或陰離子交換色譜法中顯示出可比的結(jié)果。但是，由于分離機(jī)理的差異，觀察到了不同的曲線。

? ? ? ?疏水性會(huì)影響mAb的聚集，溶解度和粘度。較高的疏水性與較高的聚集和沉淀傾向相關(guān)。CDR中的疏水性區(qū)域可導(dǎo)致更高程度的分子間相互作用，更高的粘度和更短的體內(nèi)半衰期。

疏水相互作用色譜法（HIC）已用于測(cè)量由PTM或降解引起的不同mAb或同一mAb的單獨(dú)變體的相對(duì)疏水性。與主峰相比，已報(bào)告的引起HIC保留時(shí)間變化的修飾列于表6中。某些修飾（如Asp異構(gòu)化和脫酰胺作用）可同時(shí)改變HIC保留時(shí)間，這表明其他影響色譜行為的因素也參與其中。

? ? ? ?也有文章報(bào)道了用于測(cè)量mAb相對(duì)疏水性的替代方法，例如通過(guò)鹽梯度篩選使用金納米顆粒。在這種方法中，將測(cè)試mAb加載到金納米顆粒上，然后施加鹽梯度應(yīng)力以從mAb分子表面上的疏水斑塊中剝離水分子。結(jié)果表明，測(cè)試的單克隆抗體與HIC保留時(shí)間具有良好的相關(guān)性。

? ? ? ?大量游離Cys的存在會(huì)對(duì)mAb穩(wěn)定性和效能產(chǎn)生負(fù)面影響。游離Cys和游離Cys相關(guān)修飾和降解的水平高度依賴于mAb序列以及細(xì)胞培養(yǎng)和純化過(guò)程中的環(huán)境因素。

單克隆抗體在每個(gè)Cys殘基上都含有少量的游離硫醇。游離硫醇可以降低熱穩(wěn)定性并增加可還原共價(jià)聚集體的形成。這些與mAb相關(guān)的游離半胱氨酸可與細(xì)胞培養(yǎng)基中存在的游離半胱氨酸反應(yīng)，形成半胱氨酸化或其他共價(jià)加合物。在少數(shù)情況下，檢測(cè)到相對(duì)較高的游離半胱氨酸水平，這主要是由于重鏈可變域二硫鍵的形成不完全，導(dǎo)致效能降低。

? ? ? ?由于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用對(duì)溶解度，粘度和聚集傾向的影響，因此蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用在可開(kāi)發(fā)評(píng)估期間引起了越來(lái)越多的關(guān)注。另外，體內(nèi)非特異性脫靶結(jié)合導(dǎo)致快速清除和不良PK。

? ? ? ?已開(kāi)發(fā)出多種技術(shù)來(lái)研究mAb的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，包括自身相互作用和與其他分子的非特異性相互作用。在這些技術(shù)中，Biacore，生物層干涉法（BLI）和自相互作用納米粒子光譜（SINS）已用于研究自相互作用。另一方面，當(dāng)固定了不同的蛋白質(zhì)時(shí)，交叉相互作用色譜法（CIC）可用于研究非特異性相互作用。CIC和HIC之間延遲保留之間的正相關(guān)關(guān)系表明，疏水相互作用是這些mAb總體粘性（非特異性相互作用）的主要促成因素。其他測(cè)定法，包括多特異性試劑結(jié)合測(cè)定法，以及與肝素，HEK293細(xì)胞，桿狀病毒顆粒，伴侶蛋白和酵母菌的結(jié)合，也已用于研究非特異性相互作用。

? ? ? ?如涉及知識(shí)產(chǎn)權(quán)請(qǐng)與我司聯(lián)系

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