? ? ? ?來(lái)源：生物制藥小編 ? ? ?? 近年來(lái)，PD-1/PD-L1引領(lǐng)的腫瘤免疫全面興起，免疫檢驗(yàn)點(diǎn)成為競(jìng)爭(zhēng)焦點(diǎn)。共抑制信號(hào)的免疫檢驗(yàn)點(diǎn)抑制劑抗體進(jìn)展相對(duì)順利，激動(dòng)劑抗體則出現(xiàn)較多的波折。其中很重要的問(wèn)題就是其激活機(jī)制復(fù)雜，Cross-linking對(duì)于其激動(dòng)劑活性影響很大。典型的TNFR超家族受體與配體的結(jié)合通常依賴(lài)于配體的三聚體形式，如OX40、CD40、4-1BB、DR5/DR4、GITR等。隨著機(jī)理漸漸清理，一些相對(duì)成熟的技術(shù)平臺(tái)或?qū)⒊蔀榻鉀Qcross-linking更好激活這些靶受體的方法。簡(jiǎn)單說(shuō)可以概括為以下幾類(lèi)： - 提高FcγRIIb受體的親和力，但需注意不能影響其他FcγR受體的親和力以避免影響ADCC活性等；
- 多價(jià)抗體，如Inhibrx開(kāi)發(fā)的DR5四價(jià)納米抗體，INBRX-109，四價(jià)抗體相對(duì)二價(jià)抗體可以更好的使受體寡聚化，更好的激活DR5。信達(dá)生物OX40四價(jià)抗體為類(lèi)似原理；
- 三聚體天然配體，如三葉草生物構(gòu)建OX40L三聚體、TRAIL三聚體、4-1BBL三聚體等模擬天然配體的激活效應(yīng)。羅氏則構(gòu)建了FAP/4-1BBL三聚體（雙抗形式），依賴(lài)于FAP的結(jié)合激活4-1BB；
- 多聚體抗體，如Genmab開(kāi)發(fā)了Hexabody（E345R突變，結(jié)合靶受體后形成六聚體IgG）和IgM Biosciences的IgM亞型抗體（五聚體）。多聚體抗體可以同時(shí)結(jié)合12個(gè)或10個(gè)靶受體，更有效激活靶受體；
- 個(gè)別單抗的激動(dòng)劑活性不依賴(lài)于Cross-linking，如信達(dá)生物的OX40抗體IBI101。
? ? ? ?DR5靶點(diǎn)、DR4靶點(diǎn) ? ? ? ?TRAIL-DR通路中，與TRAIL配體結(jié)合親和力最高的是DR5（TRAIL-R2），DR4（TRAIL-R1）相對(duì)弱。早年研發(fā)DR4抗體的基本都失敗了，近年來(lái)多開(kāi)發(fā)TRAIL重組蛋白或者DR5抗體。最早有效激活DR5的是諾華/ablynx開(kāi)發(fā)的四價(jià)納米抗體TAS266，即通過(guò)多價(jià)抗體更好的激活DR5。不過(guò)TAS266因肝毒性較強(qiáng)而終止臨床研究。 ? ? ? ?Inhibrx在TAS266基礎(chǔ)上研究發(fā)現(xiàn)，其免疫原性強(qiáng)且血漿中含有較強(qiáng)pre-existing ADA，導(dǎo)致過(guò)度交聯(lián)。Inhibrx認(rèn)為這種ADA引起的過(guò)度交聯(lián)是引起肝毒性的主要原因，因此開(kāi)發(fā)了免疫原性弱、無(wú)Pre-existing ADA的四價(jià)納米抗體INBRX-109。該藥物被奕安濟(jì)世引進(jìn)國(guó)內(nèi)，研發(fā)代碼為JCT-205。 ? ? ? ?IgM Biosciences和Genmab分別開(kāi)發(fā)了五聚體IgM、六聚體IgG的DR5多聚體抗體，更好的激活DR5而不再依賴(lài)于FcγRIIb-dependent cross-linking。 ? ? ? ?IgM亞型是天然五聚體形式，因此為10價(jià)抗體。IgM的一項(xiàng)重要特征是補(bǔ)體CDC活性極強(qiáng)，另一項(xiàng)特征價(jià)態(tài)高可以引發(fā)受體寡聚化在TNFR超家族受體的激活中發(fā)揮重要作用。 ? ? ? ?以下是IgM亞型DR5抗體IGM-8444的作用機(jī)制。 ? ? ? ?Genmab的Hexabody在Fc引入E345R突變，該突變使得IgG在結(jié)合抗原后Fc相互作用形成六聚體。Genmab最初的設(shè)計(jì)也是為了強(qiáng)CDC活性，同樣的，高價(jià)態(tài)使得其在受體寡聚化中發(fā)揮重要作用。Genmab的GEN-1029還特殊在用了兩個(gè)靶向DR5不同表位的Hexabody抗體，即混合物。 
? ? ? ?三葉草生物則直接構(gòu)建三聚體TRAIL配體蛋白SCB-808，這也是其核心技術(shù)。 
? ? ? ?羅氏構(gòu)建FAP/DR5雙抗RG7386提高對(duì)腫瘤組織的特異性（FAP為腫瘤特異性靶標(biāo)）。RG7386同時(shí)去除了FcγRIIb-dependent cross-linking以避免出現(xiàn)肝毒性，該雙抗更多是依賴(lài)于FAP的結(jié)合激活DR5，但看設(shè)計(jì)可能激動(dòng)劑活性不高。? ? ? ? ?復(fù)宏漢霖的HLX56為DR4抗體，具有Cross-linking效應(yīng)。不過(guò)為何舍DR5而重歸DR4，目前還不清楚其有什么新的生物學(xué)基礎(chǔ)。 ? ? ? ?OX40靶點(diǎn) ? ? ? ?強(qiáng)生2016年在JBC發(fā)表文章，將Hexabody技術(shù)應(yīng)用于開(kāi)發(fā)OX40激動(dòng)劑抗體。S267E/L328F突變可以增強(qiáng)FcγRIIb親和力，增強(qiáng)Cross-linking，但該突變同時(shí)也減弱了ADCC效應(yīng)等。因而強(qiáng)生嘗試用Hexabody來(lái)驅(qū)動(dòng)受體寡聚化，更好的激活OX40。實(shí)驗(yàn)表明，E345R突變（Hexabody）可以明顯增強(qiáng)OX40抗體的激動(dòng)劑活性。 ? ? ? ?Hexabody可以有效保留ADCC、ADCP、CDC活性。 ? ? ? ?信達(dá)生物首個(gè)OX40抗體IBI101，意外地，其激動(dòng)劑活性不依賴(lài)于FcγR-dependent cross-linking效應(yīng)。
? ? ? ?但要注意的是，信達(dá)生物同時(shí)開(kāi)發(fā)了四價(jià)OX40抗體以更好的激活OX40。此外，三葉草生物同樣開(kāi)發(fā)了OX40L三聚體蛋白SCB-340。 ? ? ? ?IgM Biosciences同樣開(kāi)發(fā)了IgM亞型的OX40和GITR抗體。 ? ? ? ?CD40靶點(diǎn) ? ? ? ?2017年百時(shí)美施貴寶在Cancer Cell上發(fā)表文章，證明CD40抗體的激動(dòng)劑活性需要FcγRIIb依賴(lài)的Cross-linking。 
? ? ? ?余國(guó)良創(chuàng)立的Apexigen其核心產(chǎn)品即CD40抗體APX005M，被認(rèn)為是最具潛力的CD40抗體。APX005M為人源化兔抗體，具有FcγR以來(lái)的Cross-linking效應(yīng)。 
? ? ? ?4-1BB靶點(diǎn) ? ? ? ?2020年1月，艾伯維在MOLECULAR CANCER THERAPEUTICS上發(fā)表文章，發(fā)現(xiàn)表位和FcγRIIb依賴(lài)的Cross-linking是決定4-1BB抗體激動(dòng)劑活性和降低肝毒性和關(guān)鍵因素。雖然對(duì)于肝毒性的影響似乎與其他研究不同，但對(duì)于激動(dòng)劑的活性無(wú)疑是又一例證。 ? ? ? ?羅氏構(gòu)建了雙抗形式的FAP/4-1BBL，其中一側(cè)為抗FAP抗體，另一側(cè)融合三聚體4-1BBL（這部分類(lèi)似于天然配體形式，三葉草生物也是類(lèi)似方式）。4-1BBL對(duì)4-1BB的激活依賴(lài)于靶抗原（FAP）結(jié)合引發(fā)的cluster，而不再需要FcγR-dependent cross-linking。類(lèi)似原理也出現(xiàn)在一系列PD-L1/4-1BB雙抗中，如基石藥業(yè)引進(jìn)的ND021、科望生物引進(jìn)的Inbrx-105、維立志博等。 ? ? ? ?還有一種方式是中外制藥采用低親和力的4-1BB抗體構(gòu)建的4-1BB/TAA共刺激雙抗，避免出現(xiàn)毒性。所謂共刺激雙抗，4-1BB/TAA雙抗本身抗腫瘤效應(yīng)很弱，主要是作為與CD3/TAA雙抗聯(lián)用。即CD3抗體、低親和力4-1BB抗體兩重信號(hào)激活T細(xì)胞，TAA解決靶向和特異性問(wèn)題。有點(diǎn)類(lèi)似于CAR-T。 ? ? ? ?再生元也設(shè)計(jì)了類(lèi)似的CD28/TAA共刺激雙抗，與CD3/TAA雙抗聯(lián)用。 ? ? ? ?賽諾菲三特異性抗體CD3/CD28/CD38與之類(lèi)似，只是將兩重信號(hào)CD3、CD28整合到一個(gè)三特異性抗體分子中。 ? ? ? ?總結(jié) ? ? ? ?Cross-linking背后是生物體內(nèi)進(jìn)化出的信號(hào)通路進(jìn)化出的寡聚體（尤其三聚體，在TNFR受體超家族最常見(jiàn)）形式。隨著機(jī)制的日漸清晰，多價(jià)抗體、FcγRIIb高親和力抗體、多聚體抗體（IgM、Hexabody）、雙抗（依賴(lài)于另一個(gè)靶點(diǎn)結(jié)合后再激活）等技術(shù)成為從不同角度解決交聯(lián)問(wèn)題的有力武器。 ? ? ? ?如涉及知識(shí)產(chǎn)權(quán)請(qǐng)與我司聯(lián)系
參考資料 Targeting the antibody checkpoints to enhance cancer immunotherapy–focus on FcγRIIB（2019）； Fc Engineering Approaches to Enhance the Agonism and Effector Functions of an Anti-OX40 Antibody（2016）； Interaction with FcgRIIB Is Critical for the Agonistic Activity of anti-CD40 antibody(2019)； Rationale for anti-CD137 cancer immunotherapy（2016）； Rationale for anti-OX40 cancer immunotherapy（2016）； The Therapeutic CD38 Monoclonal Antibody Daratumumab Induces Programmed Cell Death via Fcγ Receptor–Mediated Cross-Linking（2016）； Therapeutic activity of agonistic, human anti-CD40(2017)； Tumor-targeted 4-1BB agonists for combination with T cell bispecific antibodies as off-the-shelf therapy(2019)； Higher-Order Clustering of the Transmembrane Anchor of DR5 Drives Signaling（2019）； Exploring the TRAILs less travelled=TRAIL in cancer biology and therapy(2017)。 |
